rsrltd AQP4 Ab ELISA V2

綜合使用

該RSR AQP4自身抗體ELISA版本2試劑盒僅供專業人

員使用，用于定量測定人血清中AQP4自身抗體

(AQP4Ab)。 視神經脊髓炎(NMO)，又稱Devic綜合

征，是一種免疫介導的神經疾病，涉及脊髓和視神

經。 它可以被認為是一種不同于多發性硬化(MS)的

疾病。 血清免疫球蛋白G自身抗體(NMO-IgG)已被證

明是NMO的特異性標記，水通道水通道水通道蛋白

4(AQP4)已被鑒定為NMOIgG的抗原。 當充分的臨床

特征可能不明顯，早期干預可能預防或延遲殘疾

時，AQP4Ab的測量在區分NMO和MS方面具有相當

大的價值。

參考資料

V.A.Lennon等人。

視神經脊髓炎的血清自身抗體標志物：與多發

性硬化癥的區別。

2004364（9451）：2106-2112

V.A.Lennon等人。

視脊多發性硬化癥Ig G標記物與水通道結合。

2005年實驗醫學雜志202：473-477

B.G.Weinshenker等人。

視神經髓炎IgG預測縱向廣泛的橫向脊髓炎后復

發。

2006年神經病學年鑒59：566-569

N.Isobe等人。

視神經脊髓炎抗aquaporin-4抗體的定量分析及

亞類分析。

多發性硬化癥雜志201218：1541-155

S.Jarius等人。

ELIS A法檢測人水通道蛋白-4抗體：敏感性、

特異性及與免疫組織化學的直接比較。

神經科學雜志2012320

32-37

支出

下列適用：

歐洲EP1700120B1，

美國7,101，679

美元 B2， 美國 7,947,254

B2 和 美國

中國ZL200880040851.3

日本4538464。

亞洲原則

在RSR的AQP4AbELISA版本2試劑盒中，患者血清中

的AQP4Ab允許校準器和對照組與涂在ELISA板井和液

相生物素化AQP4(AQP4-生物素)上的AQP4相互作用。

室溫孵育2小時后隨搖，井內容物丟棄.. 與涂在井上

的AQP4結合的AQP4Ab也將通過樣品中AQP4Ab的能

力 與 AQP4-Biotin 相 互 作 用 ， 使 AQP4-Biotin 通 過

AQP4Ab橋與井結合。 然后，在第二個孵育步驟中確

定AQP4-Biotin結合的數量，該步驟涉及添加鏈霉親

和素過氧化物酶(SA-POD)，該酶與生物素特異性結

合。 過量的、未結合的鏈霉親和素過氧化物酶被沖

走，加入過氧化物酶底物3，3‘，5，5’-四乙基聯苯

胺(TMB)，形成藍色。 這種反應是通過加入一個停

止溶液來停止的，導致井內物變黃。 然后用ELISA平

板閱讀器讀取黃色反應混合物在450nm和405n m處

的吸光度。 較高的吸光度表明測試樣品中存在AQP4

自身抗體。 在405n m處讀取允許定量高吸收。 建議

在450n m處測量低于10u/mL的值.. 如果只能在一個

波長405n m處讀取，則可以使用。 測量間隔為3.0-

80u/mL(任意RSR單位)。

檔案 和發展 籌備工作

所設委員會 SERUM樣品

待分析的血清應在分離或儲存后不久測定，宜是

在-20或以下的別名中測定

奧

C. 100?L足以

作一次化驗（重復50次）? 確定)。 應避免反復凍

融或儲存溫度升高.. 不要使用脂血

癥或溶血的樣本。 研究表明，EDTA、檸檬酸和肝素

血漿樣品中加入AQP4A B陽性血清的信號與來自同一

供體的加標血清相比略有變化。 特別是OD450 加

標EDTA、檸檬酸和肝素等離子體的值為加標血清的

79%-128%(血清濃度為2.6u/ml-30u/ml)或87%-130%。

當需要時，在室溫下解凍測試血清，并輕輕混合，

以確保均勻性。 測定前離心血

清（宜在10，15，000轉/分的微格中離心5分鐘）

以去除顆粒物質。 如果血清是多云的或含有微粒，

請不要遺漏這一離心步驟。

綜合

文號 意義

歐共體遵守情況聲明

IVD 體外診斷裝置1

圣斯特

2019

年5月

第4頁2 訂正5

參考資

料

目錄編號

旅館 批號

查閱指引

由

足以

終止日期

商店

負控制

積極控制

需要但未提供的材料

能夠分發25個? L，50? L和100? L.

測量各種體積的方法，以重建或稀釋所提供的試

劑。

純凈水。

ELISA平板閱讀器適用于96個井格式，可在450nm

和405n m處測量。

ELISA平板搖床，可搖動500次/分鐘（不是軌道

搖床）。

ELIS A板蓋。

擬訂所提交的

將未開封的試劑盒和所有試劑盒組件存放在2-8

奧

C.

ASSA程序

允許所有試劑在室溫下（2025年）

奧

使用前至少

C)30分鐘。 不要重建AQP4-生物素，直到下面的步驟

2。 對于步驟2、5、8和9，建議使用Eppendorf型重

復吸管。

1. 管道50? 將病人血清、校準器(B1-5)和

對照器(C1-2和D)放入各自的井中。 留

下一個

空得很空。

2. 重組 AQP4-生物毒素 和

移液管25? 入每口井（空

白除外）..

3. 蓋上框架，在室溫下用ELIS A法搖動2小

時

平板搖床（每分鐘500搖）。

4. 使用ELIS A板墊圈吸氣，用稀釋洗滌液

(J)洗三次井。 如果沒有平板墊圈，用

適當的貯器迅速地將井框倒置，然后用

手洗三次，然后輕輕地用干凈的干吸收

劑輕輕地敲擊倒置的井

表面去除多余的洗滌。

E.

AQP4-

Biotin3小瓶

凍干機

在使用前，立即用重建緩沖器重建

AQP4-生物毒素(F)，

每瓶1.5毫升。 不止一瓶

要使用，將瓶子的內容物集中起

來，輕輕混合。

F

AQP4-生物素重建緩沖劑10mL

準備使用

G.

鏈霉親和素過氧化物酶(SA-POD)

0.8米L

用 稀 釋 劑 在 20 中 稀 釋 1 ， 以 稀 釋

SAPOD(H) 。 例 如 ， 0.5 米 L(G)+9.5 米

L(H)。 2-8多儲存16周

奧

C.C

稀釋后。

H.

SA-POD15m L稀釋

劑

準備使用

我

是

過氧化物酶(TMB)15米L

準備使用

J

濃縮洗滌液120毫升

集中

使用前用純水稀釋1/10..

儲存于2-8

奧

直到工具包失效日期。

KK

停止使用14

米升

準備使用

A.

AQP4覆蓋井

一個框架內12條8口井（總共96口）的破

碎條，密封在箔袋中。 允許箔袋在室溫

下站立（20-25）

奧

C)30分鐘

在打開之前。

確保井牢固地安裝在所提供的框架中。

打開后，將任何未使用的井返回原箔袋，

并用膠帶密封。 然后將鋁箔袋放入裝有

干燥劑的自封塑料袋中，存放于2-8

奧

C

多

4個月。

B1-

5

計算器

1.5、5、20、40、80微克/升

(任意RSR單位)

準備使用

C1-

2

積極控制一和二

（見濃度范圍標簽）

準備使用

D.D.

負控制

0.7米

準備使用1

圣斯特

2019

年5月

第4頁3 訂正5

在405n m處的吸光度讀數可以通過乘以適當的因

子(在RSR使用的設備的情況下為3.4)來轉換為

450nm的吸光度..

關閉警報

陰性 <3.0u/m L

積極正面 ? 3.0u/m L

結果分析

通過在x軸（對數標度）上繪制校準器濃度與y軸

（線性標度）上校準器的吸光度之間的關系，可

以建立校準曲線。 然后，患者血清中的AQP4Ab

濃度可以讀出校準曲線[在RSR上繪制為樣條log/lin

曲線（平滑因子=0）]。 可以使用其他數據還原系

統.. 陰性對照可賦值0.15u/ml，協助計算機處理分

析結果。 AQP4Ab濃度高于80u/mL的樣品可以稀

釋(例如。

AQP4A b陰性血清中10x和/或100x)。 有些血清不

會以線性的方式稀釋。

實際結果（僅示例；不用于計算實際結果）

這一切斷已在RSR驗證。 然而，每個實驗室應建立

自己的正常和病理參考范圍的AQP4Ab水平。 此

外，建議每個實驗室在分析中包括自己的對照樣品

面板。

化學評價

(以下資料來自450nm數據)

臨床特異性

來自358名個人健康獻血者的血清在AQP4AbELISA

版本2試劑盒中進行了測試。 356（99%）血清為

AQP4Ab陰性。

臨床敏感性

在62例NMO或NMO頻譜紊亂(NMOS D)患者中，48

例（77%）為AQP4Ab陽性。

下限檢測限

陰性對照測定20次，計算均值和標準差。 在2個

標準差下檢出限為

0.17微克/升

內測精度

樣本 平均單位/單位L

（單位=25）

簡歷

（%）

1 3.9 7.7

2 7.0 8.6

3 28 3.2

4 58 3.1

Inter Assess精準度

樣本 平均單位/單位L

（單位=20）

簡歷

（%）

A. 5.0 15.6

B.B. 13.3 10.5

C.C 35 7.9

D.D. 59 7.5

4

5

0

n

m

處

的

吸

光

度

5. 管道100? 稀釋后的SA-POD(G)升

每口井（空白除外）。

6. 蓋上盤子，孵育20分鐘

室溫下在ELISA平板搖床上分鐘（每分鐘

500次搖）。

7. 重復洗滌步驟4。 如果正在進行手動清

洗，則使用純水進行后清洗步驟（以

去除任何泡沫）。

在把井敲干之前。

8. 管道100? 將TMB(I)L放入每口井中（包括

空白），室溫下在黑暗中孵育20分鐘。

沒有顫抖。

9. 管道100? 將L停止溶液(K)注入每口井

（包括空白），并在平板搖床上搖動約5

秒。 確保底物孵育

每口井都是一樣的。

10. 在10分鐘內，用ELIS A板閱讀器讀取每口

井在450nm和405n m處的吸光度，并在

100口井上空白? TMB(I)及

100? 只有L停止溶液(K)。

A450

nm波

長

Conc.

單

位：

A405

nm

波長

Conc.

單

位：

陰性對照(D) 0.021 0.006

B1 0.085 1.5 0.024 1.5

B2 0.354 5 0.108 5

B3 1.577 20 0.468 20

B4 3.802 40 1.118 40

B5 6.588 80 1.938 80

積極控制(C I) 0.755 12.1 0.224 12.0

陽性對照(CII) 2.506 28 0.745 281

圣斯特

2019

年5月

第4頁4 訂正5

臨床準確性

除視神經脊髓炎頻譜紊亂(NMOS D)以外的自身免

疫性疾病患者的205份血清分析表明，自身抗體

對TSH受體(n=110)、谷氨酸脫羧酶(n=26)、21羥化

酶(n=12)、乙酰膽堿受體(n=10)、甲狀腺過氧化物

酶(n=15)、甲狀腺球蛋白(n=10)、IA-2(n、7)或類

風濕因子(n=15)的干擾。

干涉

當樣品加入以下材料時，沒有觀察到干擾；膽紅素

在20mg/dL或脂內高達3000mg/dL。 血紅蛋白在

500mg/dL時有干擾。

安全考慮

鏈霉親和素過氧化物酶(SA-POD)信號

詞：警告

危險說明

H317：可能會引起皮膚過敏反應

P280：戴上防護手套/防護服/眼睛保護/面部保

護

P302+P352：如果在皮膚上：用大量肥皂和

水清洗

P333+P313：如果發生皮膚刺激或皮疹：請就

醫/注意

P362+P364：脫去污染的衣著，洗凈后再用

過氧化物酶(TMB)信號

詞：危險危險聲明

H360D：可能會傷害未出生的孩子

亞洲計劃

防范說明

P280：戴上防護手套/防護服/眼睛保護/面部保護

P308+P313：如果暴露或有關：獲得醫療建議/

注意

該工具包僅供專業人員使用。 仔細遵照指示。 觀察

標簽上規定的過期日期和重組試劑的穩定性。

有關更詳細的安全信息，請參閱安全數據表。 避免

所有可能導致攝入的行為。 避免接觸皮膚和衣物..

穿著防護服。 用于制備試劑盒的人類來源材料已進

行了測試，發現HIV1和2、HCV抗體和HBsAg均無反

應，但應毫無反應地處理為具有潛在傳染性。 如果

有污染，在離開實驗室之前*洗手。 對所有潛在

污染的廢物進行消毒，包括處置前的測試樣本。 用

于制備試劑盒的動物來源材料已從經認證為健康動

物中獲得，但這些材料應作為潛在的傳染性處理。

部分成分含有少量疊氮鈉作為防腐劑.. 與所有試劑

盒成分，避免攝入，吸入，注射或接觸皮膚，眼睛

或衣服.. 避免在排水系統中形成重金屬疊氮化物，

方法是用大量的水沖走任何試劑盒組件。

允許所有試劑和樣品達到室溫（20-25）

奧

使用前C)

吸管： 50? L校準器、對照組和病人血清

吸管： 25? LAQP4-Biotin（重組)進入每口井(空白除外）

孵化： 2小時室溫下在ELISA平板搖床上500搖/分鐘

作為/決定： 板塊

洗滌： 盤子三次，用吸水性材料吸干

1

吸管： 100? LSA-POD（稀釋1：20)注入每口井(空白除外）

孵化： ELISA平板搖床室溫20分鐘，500搖/分鐘

作為/決定： 板塊

洗滌： 盤子三次，用吸水性材料吸干

1,2

吸管： 100? 每口井的L-TMB（包括空白）

孵化： 20分鐘室溫黑暗中不搖晃

吸管： 100? 每口井中停止溶液（包括空白），搖動5秒

在加入停止溶液10分鐘內讀取450nm和405n m處的吸光度

3

1

使用自動洗盤機時，洗盤后不必抽干

2 人工清洗時用純凈水進行后清洗

3如果只能在一個波長下讀取，則可以使用405nm